一、使用前的准备
使用色谱仪前，必须完成以下准备工作：
- 参加培训：未经专业培训不得操作色谱仪。需要参加相关机构组织的仪器使用培训，如Biostage快速制备色谱仪或制备型高效液相色谱仪的专项培训。
- 注册账户：在仪器设备共享管理平台完成注册，通常需要通过学校或机构的统一身份认证系统进行。
- 预约使用：培训合格后，经申请同意可获得仪器预约使用权限，然后可通过共享平台预约使用时间。
二、色谱仪的基本操作流程
- 样品准备：
- 根据分析需求准备样品，液体样品可直接进样，固体样品需适当溶解。
- 对于定量分析，需配制标准溶液和样品溶液。
- 仪器设置：
- 开启色谱仪和配套设备，如检测器、数据采集系统等。
- 根据分析目的设置色谱条件，包括流动相组成、流速、柱温、检测波长等参数。
- 对于制备型色谱，还需设置上样方式（固体上样或液体上样）和洗脱程序。
- 系统平衡：
- 用流动相冲洗色谱柱，直至基线稳定。
- 检查系统压力是否正常，确保无泄漏。
- 进样分析：
- 使用微量进样器或自动进样器注入样品。
- 启动数据采集系统，记录色谱图。
- 监控分离过程，必要时调整参数。
- 数据处理：
- 分析色谱图，计算各组分的保留时间、峰面积等参数。
- 对于定量分析，根据标准曲线计算样品中目标物含量。
三、色谱柱的使用与维护
色谱柱是色谱仪的核心部件，正确使用和维护对保证分析结果至关重要：
- 柱效评价：
- 色谱柱的柱效能可用理论塔板数或理论塔板高度来衡量，塔板数愈多或塔板高度愈小，色谱柱的分离效能愈好。
- 定期使用标准品测试柱效，确保色谱柱性能符合要求。
- 提高柱效的方法：
- 适当降低移动相的流速（但会延长分析时间）。
- 优化固定相的量和粒径。
- 控制合适的柱温。
- 选择合适的流动相组成和pH值。
- 色谱柱的保养：
- 使用前后用适当的溶剂冲洗色谱柱。
- 长期不用时，保存在合适的溶剂中（通常为有机溶剂）。
- 避免压力剧烈变化和机械震动。
- 使用预柱保护分析柱。
四、注意事项与安全操作
- 严格遵守实验室安全规定，佩戴适当的个人防护装备。
- 有机溶剂多为易燃易爆品，需远离火源，在通风橱中操作。
- 废液按规定收集处理，不可直接倒入下水道。
- 定期检查管路连接，防止泄漏。
- 记录仪器使用情况和维护日志，便于问题排查。
- 遇到异常情况（如压力过高、基线漂移等）应立即停止操作，寻求专业人员帮助。
五、不同类型色谱仪的特点
- 制备型色谱仪：
- 主要用于中药、天然药物、有机合成物质等方面的单体快速分离和制备。
- 能将加样、分离、纯化、结果分析等过程整合并自动完成。
- 具备正反相洗脱功能，具有多溶剂通道和梯度洗脱系统。
- 分析型色谱仪：
- 主要用于定性定量分析，检测灵敏度高。
- 样品用量少，分析速度快。
- 配备多种检测器，如紫外检测器、荧光检测器、质谱等。
正确使用色谱仪需要专业知识和实践经验。初学者应在有经验的人员指导下操作，并不断学习和积累经验，才能充分发挥色谱仪的分析能力，获得准确可靠的分析结果。
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